Pregunta: Ponte las gafas de seguridad y los guantes. Golpee suavemente la botella de α-amilasa para que el polvo se acumule en el fondo del recipiente. Retire con cuidado tanto la tapa como la punta de la botella y reserve. Use el cilindro graduado de 25 ml para medir y agregue 12,0 ml de agua destilada a la botella. Regrese la punta y la tapa a la botella y agite

1. Ponte las gafas de seguridad y los guantes.
2. Golpee suavemente la botella de α-amilasa para que el polvo se acumule en el fondo del recipiente.
3. Retire con cuidado tanto la tapa como la punta de la botella y reserve.
4. Use el cilindro graduado de 25 ml para medir y agregue 12,0 ml de agua destilada a la botella.
5. Regrese la punta y la tapa a la botella y agite vigorosamente hasta que se mezcle el contenido.
6. Cree un baño de agua caliente con el combustible del quemador, el soporte del quemador y el vaso de precipitados de vidrio de 250 ml.
7. Mientras se calienta el agua, use el marcador permanente para etiquetar tres tubos de ensayo como "almidón" y otros tres tubos de ensayo como "amilasa".
8. Coloque los seis tubos de ensayo en pocillos vacíos de la placa de 24 pocillos, utilizando la placa de pocillos como soporte para tubos de ensayo.
9. Agregue 4 gotas de solución de almidón al 1% a cada uno de los tubos de ensayo de almidón.
10. Agregue 4 gotas de solución de α-amilasa a cada uno de los tubos de ensayo de amilasa.
11. Apague la llama del quemador una vez que el agua alcance el punto de ebullición.
12. Coloque con cuidado un tubo de ensayo de almidón y un tubo de ensayo de amilasa en el baño de agua. Consulte la figura 8.

Tratamiento de baño de agua caliente.

1. Permita que los tubos permanezcan en el baño de agua durante 5 minutos.
2. Durante el período de 5 minutos, use el termómetro para medir la temperatura del agua y regístrela en la Tabla de datos 2 .
3. Después de 5 minutos, vierta con cuidado el contenido del tubo de ensayo de α-amilasa en el tubo de ensayo de almidón y vuelva a colocar el tubo de ensayo de almidón en el baño de agua.
4. Permita que la solución de enzima y almidón reaccione durante 1 minuto.
5. Después de 1 minuto, use una pipeta limpia para agregar 1 gota de indicador IKI al tubo de ensayo e inmediatamente observe el color de la solución.
6. Anota tus observaciones del color de la solución inicial en la Tabla de datos 2 .
7. Compare el color de la solución en el tubo de ensayo con las soluciones en la Figura 9 para determinar la presencia de almidón.

Resultados de IKI para la prueba de almidón. Las soluciones grises, marrones o negras indican la presencia de almidón. Las soluciones claras de color ámbar indican la ausencia de almidón.

1. Registre la presencia o ausencia de almidón en la Tabla de datos 2 .
2. Retire el tubo de ensayo de almidón del baño de agua y colóquelo en posición vertical en un pocillo vacío en el lado izquierdo de la placa de 24 pocillos.
3. Deje que el baño de agua caliente se enfríe por debajo de 40°C.
4. Retire con cuidado el vaso de precipitados de 250 ml del soporte del quemador y deseche el agua.
5. Cree un baño de agua a 37 °C en el vaso de precipitados de 250 ml.

Nota: Puede usar agua tibia de un grifo o del quemador para crear el baño de agua. Solo es importante que el agua esté a 37°C.

1. Repita los pasos 12-20 usando el baño de agua a 37°C.
2. Retire el tubo de ensayo de almidón del baño de agua y colóquelo en posición vertical en un pocillo vacío en la fila central de la placa de 24 pocillos.
3. Deseche el agua del vaso de precipitados.
4. Crea un baño de hielo en el vaso de precipitados de 250 ml llenándolo hasta la mitad con hielo picado y agua fría del grifo.
5. Repita los pasos 12 a 20 usando el baño de hielo.
6. Retire el tubo de ensayo de almidón del baño de agua y colóquelo en posición vertical en un pocillo vacío en el lado derecho de la placa de 24 pocillos.
7. Deje que los tres tubos de ensayo permanezcan en la placa de pocillos a temperatura ambiente durante 10 minutos.
8. Después de 10 minutos, observe las soluciones en cada tubo y registre el color de la solución final en la Tabla de datos 2 .
9. Compare el color de la solución en el tubo de ensayo con las soluciones en la Figura 9 para determinar la presencia de almidón.
10. Registre la presencia o ausencia de almidón en la Tabla de datos 2 .
11. Retire los tubos de ensayo y limpie la placa de pocillos para usar en la Parte 2.

Parte 2: Efectos del pH

1. Escriba la fecha de su nombre en una nueva hoja de papel.
2. Coloque la placa limpia de 24 pocillos en la hoja de papel que contiene su nombre y fecha.
3. Etiquete la hoja 1-4 debajo de los cuatro pocillos inferiores.
4. Utilice el marcador permanente para etiquetar cuatro pipetas limpias "tampón de pH 3,5", "tampón de pH 5,0", "tampón de pH 6,8" y "tampón de pH 11,5".
5. Retire las puntas de los goteros de cada una de las botellas de solución tampón y extraiga las soluciones en las pipetas correctamente etiquetadas.
6. Coloque cada pipeta con el bulbo hacia abajo en pocillos vacíos de la placa de 24 pocillos, utilizando la placa de pocillos como soporte para pipetas. Consulte la figura 10.

Configuración de pH.

1. Agregue las siguientes soluciones en el orden indicado a los pocillos etiquetados:
   • Pozo 1: agregue 6 gotas de tampón de pH 3.5, 2 gotas de solución de α-amilasa y luego 2 gotas de solución de almidón al 1%.
   • Pozo 2: agregue 6 gotas de tampón de pH 5.0, 2 gotas de solución de α-amilasa y luego 2 gotas de solución de almidón al 1%.
   • Pozo 3: agregue 6 gotas de tampón de pH 6.8, 2 gotas de solución de α-amilasa y luego 2 gotas de solución de almidón al 1%.
   • Pocillo 4: añadir 6 gotas de tampón de pH 11,5, 2 gotas de solución de α-amilasa y luego 2 gotas de solución de almidón al 1 %.
2. Permita que cada una de las reacciones ocurra durante 1 minuto.
3. Después de 1 minuto, agregue 1 gota de indicador IKI a las soluciones en cada pocillo.
4. Observe el color de las soluciones en cada pocillo y regístrelo en la Tabla de datos 3 .
5. Compare los colores de las soluciones en los pozos con las soluciones en la Figura 9 para determinar la presencia de almidón.
6. Registre la presencia o ausencia de almidón en cada pocillo en la Tabla de datos 3 .
7. Tome una foto de la placa de pocillos que muestre las soluciones en cada pocillo y su nombre y fecha en la hoja de papel.
8. Sube la imagen a la Foto 2 .

Limpiar:

• Deseche correctamente las soluciones en la placa de pocillos y las pipetas químicas usadas.
• Limpie todo el equipo de laboratorio con agua y jabón y déjelo secar completamente.
• Devuelva los artículos limpios y secos al kit de laboratorio para uso futuro.

Tabla 2

Tepratura Color de la solución inicial Color de la solución inicial Color de la solución final Almidón presente-final (S/N)

CALIENTE 91°C Amarillo - Verde Y Verde Y

37°C 37 °C Amarillo N Amarillo N

HIELO 3 °C Naranja - Amarillo N Amarillo N

Tabla 3

pH Color Almidón presente (S/N)

3.5 Naranja Y

5.0 Naranja Y

6.8 Amarillo N

11.5 Negro Y

Ejercicio 2 - Preguntas

Pregunta 1

1. Describe la relación entre la temperatura y la actividad enzimática de la α-amilasa.

a. De las tres temperaturas probadas, ¿cuál es la temperatura óptima para la actividad enzimática?

b. ¿Alguna de las temperaturas hizo que la enzima se desnaturalizara?

Explique su respuesta haciendo referencia a sus resultados en la Tabla de datos 2.

• Pregunta 2

2. ¿Cuál es el rango de pH para la actividad de la α-amilasa? ¿Alguno de los niveles de pH hizo que la enzima se desnaturalizara? Explique su respuesta haciendo referencia a sus resultados en la Tabla de datos 3 y la Foto 2.

Pregunta 3

3. ¿Sus resultados sobre los efectos de la temperatura y el pH en la actividad de la α-amilasa respaldan la digestión del almidón que se produce en la boca y los intestinos, pero no en el estómago de los seres humanos? Explique sus resultados haciendo referencia a sus datos y la temperatura y el pH de la boca, el estómago y el intestino delgado.