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  • Pregunta: 1. ¿Por qué es necesario inactivar por calor la exonucleasa I? 2. ¿Por qué es necesario realizar dos rondas de PCR en nuestro experimento de clonación? 3. Algunos de sus compañeros de clase acaban de darse cuenta de que, al configurar la reacción de PCR inicial, se utilizó la mezcla maestra MMNP (que contiene el conjunto anidado de cebadores). Luego, para la

    1. ¿Por qué es necesario inactivar por calor la exonucleasa I?

    2. ¿Por qué es necesario realizar dos rondas de PCR en nuestro experimento de clonación?

    3. Algunos de sus compañeros de clase acaban de darse cuenta de que, al configurar la reacción de PCR inicial, se utilizó la mezcla maestra MMNP (que contiene el conjunto anidado de cebadores). Luego, para la segunda PCR "anidada", el grupo usó la mezcla maestra MMIP (que contiene el conjunto inicial de cebadores). ¿Espera que esta serie de reacciones haya producido los mismos productos de PCR que si hubieran realizado la reacción correctamente? Explicar.

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    Esta es la mejor manera de resolver el problema.
    Solución

    1) Exonucleasa I: La exonucleasa es una enzima que elimina los nucleótidos no coincidentes en el extremo 3' del ADN por hidrólisis. Ejemplo: La ADN polimerasa I en E. coli actúa como una exonucleasa y elimina el nucleótido incorrecto insertado. Antes

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