Pregunta: 1. Los grupos sulfhidrilo tienen la capacidad de reaccionar con el reactivo alquilante N-etilmaleimida (NEM) en experimentos de modificación química. Cuando se agrega NEM a una solución purificada de creatina quinasa, se alquila Cys 278, pero no se modifican otros residuos de Cys en la proteína. ¿Qué puedes inferir sobre el residuo Cys 278 basado en esta

1. Los grupos sulfhidrilo tienen la capacidad de reaccionar con el reactivo alquilante N-etilmaleimida (NEM) en experimentos de modificación química. Cuando se agrega NEM a una solución purificada de creatina quinasa, se alquila Cys 278, pero no se modifican otros residuos de Cys en la proteína. ¿Qué puedes inferir sobre el residuo Cys 278 basado en esta observación? 2. Según el resultado descrito en la Pregunta 1, los investigadores utilizaron la técnica de mutagénesis dirigida al sitio para sintetizar cinco proteínas mutantes de creatina quinasa en las que Cys 278 se reemplazó con un residuo Gly, Ser, Ala, Asn o Asp. Estos mutantes se denominaron C278G, C278S, C278A, C278N y C278D, respectivamente, para indicar la posición exacta del cambio de aminoácido. Las actividades de las enzimas mutantes se midieron en presencia y ausencia de cofactores específicos. a. Todos los mutantes habían disminuido la actividad de la creatina quinasa en comparación con la enzima de tipo salvaje. ¿Qué información te da esto sobre el mecanismo de la enzima de tipo salvaje? b. Se comparó la actividad de las enzimas mutantes C278D y C278N y se encontró que la actividad del mutante C278D era 12 veces mayor que la actividad del mutante C278N (aunque ambos mutantes tenían actividades enzimáticas más bajas en comparación con el tipo salvaje) . Sugiera una explicación para esta observación. C. Las actividades de las enzimas mutantes (aunque disminuyeron con respecto al tipo salvaje) aumentaron cuando se agregaron iones de cloruro o bromuro a la mezcla de ensayo. (Una excepción fue el mutante C278D). ¿Por qué crees que los iones pudieron aumentar la actividad enzimática? d. El mutante C278D fue una excepción a la observación descrita en la Pregunta 2c anterior. Este mutante no mostró un aumento de la actividad enzimática en presencia de iones cloruro y bromuro; de hecho, su actividad enzimática mínima disminuyó algo en presencia de estos iones. Explicar por qué.