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  • Pregunta: 1-Las enzimas de restricción vienen en una concentración de U/ml, y se recomienda utilizar 1U por cada ug de ADN a digerir. Si una enzima que quieres usar llega a 22.000U/ml, y quieres digerir 5 ug de ADN. ¿Cuánto volumen tendrá que usar para la reacción y cómo podrá medirlo con las pipetas que tenemos en el laboratorio? 2- La enzima

    1-Las enzimas de restricción vienen en una concentración de U/ml, y se recomienda utilizar 1U por cada ug de ADN a digerir. Si una enzima que quieres usar llega a 22.000U/ml, y quieres digerir 5 ug de ADN. ¿Cuánto volumen tendrá que usar para la reacción y cómo podrá medirlo con las pipetas que tenemos en el laboratorio?




    2- La enzima Alu 1 viene en una concentración de 5.000 U/ml. Su búfer viene 10X. El ADN se encuentra a una concentración de 4 μg/μl. Se le indica que realice una reacción de digestión de 12 μg de ADN en un volumen total de 25 μl.
    Debe utilizar 1 U/μg de ADN.
    - ¿En qué volumen los obtendrás?
    - ¿Cómo los distribuiría?
    - Preparar la siguiente tabla con los reactivos de reacción:
    Tampón ______ μl
    ADN ________ug ______ μl
    Enzima ________U ______ μl
    Agua ______ μ

    3-La enzima BamH1 viene en una concentración de 100.000 U/ml. Se le pide que digiera 20 ug de ADN con esta enzima.
    - ¿Cuántas unidades necesitarás?
    - ¿Cómo se dispensarán?
    6. Una enzima para ligadura (Cip) viene a una concentración de 16.000 unidades/ml. ¿Cuántas unidades habrá en 10 ul?

    7-Preparar la siguiente reacción enzimática, presentarla en forma tabulada.
    En un volumen final de 30 μl, donde utiliza tampón 4 (10X), se trata de digerir 10 μg de ADN (su concentración es de 1,0 μg/μl) y utilizando 20 unidades de la enzima JplG III (su concentración es de 22.000 U / ml ). ¿Qué volumen serviría cada reactivo? ¿Y agua? ¿Algún problema? Explica y muestra tu trabajo.

    8-
    La enzima DNA pol 1 se presenta en una concentración de 50.000 U/ml. Tienes que preparar una reacción de PCR de 50 μl donde debes usar 0.05U/ul de reacción. Agregas 10 μl de tampón de PCR, 2ng de ADN templado que está a una concentración de 0,5ng/μl, primers (que son 200mM) para que cada uno esté a una concentración de 200μM, Mg+2 es 5mM (10X), enzima y agua. Presentar la tabla de todos los reactivos incluidos en la reacción, los volúmenes de cada uno en μl. Presente donde se aplica la concentración inicial y final de cada reactivo. Suponga que tiene micropipetas para todos los valores.


    9. La enzima Nde1 se presenta en una concentración de 40U/ul. Según el fabricante, el envase tiene capacidad para 10.000 reacciones de 2 μg de ADN, siendo recomendable 1U/μg de ADN. Cuantas unidades trae el paquete? ¿A qué concentración en U/ml viene la enzima? Si tuviera que usar 10U para una reacción de 10 ugs de ADN como me serviría?

    10. Se usa una solución de fago de una dilución en serie para inocular una placa de E coli en el ensayo de plaquetas de doble capa. A las 24 horas tienes 148 placas. Contando que el stock original era 0.1, y con eso usaste la sexta dilución de la serie, ¿cuánto es el PFU para ese fago en esta cepa de E coli? ¿Cuál es el factor de dilución para esta placa?



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    To determine how much of the restriction enzyme to use for digesting 5 µg of DNA, start by recognizing that the recommended enzyme amount is 1 unit (U) per µg of DNA. Thus, calculate the total enzyme units needed as units.

    Según el Reglamento de Chegg, he respondido 7 preguntas. Publique la última pregunta por separado para obtener una respuesta. Para digerir 1 µg de ADN, la cantidad de enzima de restricción necesaria es de 1U Entonces, para digerir 1 µg de ADN, la can…

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