Pregunta: 1. Estaremos separando proteínas citosólicas durante el laboratorio de cromatografía en columna DEAE (Laboratorio 4 – ProtPure). (i) ¿Por qué no podemos usar las otras fracciones subcelulares durante este laboratorio? (ii) ¿Qué tendríamos que hacer para separar las proteínas de las otras fracciones subcelulares? 2. Determine cómo haría 3 ml de cada tampón

1. Estaremos separando proteínas citosólicas durante el laboratorio de cromatografía en columna DEAE (Laboratorio 4 – ProtPure). (i) ¿Por qué no podemos usar las otras fracciones subcelulares durante este laboratorio? (ii) ¿Qué tendríamos que hacer para separar las proteínas de las otras fracciones subcelulares?

2. Determine cómo haría 3 ml de cada tampón (NaCl 12, 25, 75 y 150 mM) usando 2

Soluciones madre de NaCl mM y 300 mM (consulte la Parte C: Preparación del tampón en el laboratorio 4). Espectáculo

su trabajo para al menos uno de los cálculos . Respuestas correctas sin ejemplo de

cómo obtuviste tus números se contará como incorrecto incluso si tienes las respuestas correctas.

(Haga una copia de sus respuestas a esta pregunta para usar en la Práctica 4).

3. Tres grupos de laboratorio aislaron fracciones subcelulares del tejido hepático y otros tres grupos

fracciones subcelulares aisladas de tejido cerebral. Las concentraciones de proteína de la

fracción nuclear del tejido hepático midió 4,7, 6,3 y 5,9 mg/ml mientras que la proteína

concentraciones de la fracción nuclear del tejido cerebral medidas 9.4, 10.5 y 8.9

mg/ml. (i) ¿Son significativamente diferentes desde el punto de vista estadístico los valores de los dos tejidos diferentes?

(ii) ¿Por qué sí o por qué no? Copie la tabla de su hoja de cálculo que demuestra sus cálculos estadísticos.

(1.5 pts) 4. El siguiente gráfico muestra los cambios en los niveles de proteína citosólica (medidos por la absorbancia

a 595nm, eje y) entre una serie de fracciones recolectadas luego del intercambio iónico

cromatografía utilizando perlas de DEAE Sepharose. Se pueden ver cinco picos de proteína en los datos representados (línea continua). Estos picos son el resultado del patrón de elución de diferentes proteínas a medida que se eliminan de la columna de cromatografía al aumentar las concentraciones de sal en el tampón de elución (ver el perfil de aumento de la concentración de sal en el gráfico que comienza con la fracción 8, línea discontinua). Complete la siguiente tabla indicando (a) en qué fracción(es) se encuentra cada pico de proteína, (b) las cargas relativas de las proteínas dentro de los cinco picos de proteína en el gráfico y (c) una breve explicación de los valores de carga que asignó (es decir, qué picos contienen proteínas con carga más positiva y qué picos contienen proteínas con carga más negativa). Use una escala en su respuesta donde 4+ es más positivo, seguido de 3+, 2+, 1+, neutral, 1-, 2-, 3- y 4- (más negativo).