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  • Pregunta: 1. ¿Cuál sería el resultado si omitiera el paso de bloqueo (incubación de la membrana en un tampón que contiene proteína de leche) del desarrollo de la inmunotransferencia? ¡Explica tu lógica! 2. ¿Cuál es el propósito de la fosfatasa alcalina unida al anticuerpo secundario? ¿Qué se debe agregar y cómo funciona? 3. Utilice esta curva estándar del ensayo de

    1. ¿Cuál sería el resultado si omitiera el paso de bloqueo (incubación de la membrana en un tampón que contiene proteína de leche) del desarrollo de la inmunotransferencia? ¡Explica tu lógica!

    2. ¿Cuál es el propósito de la fosfatasa alcalina unida al anticuerpo secundario? ¿Qué se debe agregar y cómo funciona?

    3. Utilice esta curva estándar del ensayo de proteínas Pierce 660nm. Prepara una muestra que contiene 50 μL de una solución de proteína desconocida, que da una absorbancia de 0,29 a una longitud de onda de 660 nm. ¿Qué harías para obtener la concentración de proteína de esta muestra?

    4. Utilice esta curva estándar del ensayo de proteínas Pierce 660nm. ¿Incluiría todos los puntos de datos al dibujar su línea de mejor ajuste? Explique la importancia de hacer el ensayo por duplicado.

    5. Utilice esta curva estándar del ensayo de proteínas Pierce 660nm. Si prepara una muestra que contiene 50 uL de una solución de proteína desconocida, con una absorbancia de 0,15 a una longitud de onda de 660 nm. ¿Cuál es la concentración de proteína de esta muestra?

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    Esta es la mejor manera de resolver el problema.
    Solución

    Respuesta 1) El paso de bloqueo es muy importante en el desarrollo de inmunotransferencias. Si no se realiza ningún paso de bloqueo con leche desnatada al 5-10 % o albúmina de suero bovino (BSA) al 3 %, el anticuerpo dirigido a la proteína deseada se

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